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RNA酶的用途及破碎細(xì)胞和滅活RNA酶同步進(jìn)行的方法

RNA酶又名核糖核酸酶，為白色凍干粉末，可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系，可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制，可以治療乙肝。RNA酶用途說(shuō)明：生化研究，測(cè)定核酸的結(jié)構(gòu)RNase保護(hù)檢測(cè)去除非特異結(jié)合的RNA分析RNA序列水解蛋白樣品中的RNA純化DNA此外，它具有顯著的細(xì)胞毒性，可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系，可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制，可以治療乙肝。破碎細(xì)胞和滅活RNA酶同步進(jìn)行的方法用強(qiáng)烈變性如鹽酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎，核蛋...

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常見(jiàn)的RNA酶抑制劑

RNA酶抑制劑具有廣譜的RNA酶抑制作用，包括中性的真核生物的RNA的抑制作用。?分子量是50kDa的蛋白質(zhì)通過(guò)非共價(jià)鍵與RNA酶以1：1的比例結(jié)合發(fā)揮它的抑制作用。RNA酶抑制劑與RNA酶結(jié)合的有效濃度時(shí)10-14M。而且，RNA酶抑制劑的動(dòng)力學(xué)結(jié)合是非常迅速的，確保與RNA酶的迅速絡(luò)合，并對(duì)其產(chǎn)生迅速的抑制作用。常見(jiàn)的RNA酶抑制劑1、焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一種強(qiáng)烈但不*的RNA酶抑制劑，他通過(guò)和RNA酶的活性基因團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。...

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如何避免RNA酶的污染

RNA的化學(xué)性質(zhì)比DNA活躍得多。RNA分子上緊鄰磷酸二脂鍵的2′羥基基團(tuán)能直接被RNA酶利用來(lái)作為活性因子，從而使得RNA酶無(wú)需金屬離子就能發(fā)揮活性。由于RNA酶在環(huán)境中廣泛存在，特別是RNaseA，結(jié)構(gòu)極其穩(wěn)定，不能通過(guò)高溫高壓滅菌失活，因而極難消除，對(duì)保持RNA樣品的完整性構(gòu)成極大的威脅。由于RNaseA類酶依賴于活性位點(diǎn)處的組氨酸殘基起催化作用，因此能被組氨酸烷化劑DEPC所抑制。避免RNA酶的污染的方法：1．塑料制品：盡可能使用無(wú)菌、一次性塑料制品。已標(biāo)明RNase...

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福林酚法測(cè)蛋白含量步驟

福林酚法測(cè)蛋白含量早是由Lowry確定的測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的基本方法。以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度。福林酚法測(cè)蛋白含量原理：蛋白質(zhì)與福林酚試劑反應(yīng),生成深藍(lán)色復(fù)合物.藍(lán)色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比.可用分光光度計(jì)于500nm波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定.與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照,而確定蛋白質(zhì)含量.福林酚法測(cè)蛋白含量所需試劑Folin—酚試劑：1.試劑甲1)4%碳酸鈉溶液2)0.2...

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IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá)步驟說(shuō)明

異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一種作用*的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。當(dāng)有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）即可被誘導(dǎo)。在這個(gè)操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)b－半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。材料1、誘導(dǎo)表達(dá)材料(1)LB（Luria—Bertani）)培養(yǎng)基酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl1...

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IPTG誘導(dǎo)原理

異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導(dǎo)物，X-gal為生色底物，二者共同用于藍(lán)白斑篩選。IPTG可誘導(dǎo)載體lac操縱子DNA區(qū)段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段，該片段可與宿主細(xì)胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實(shí)現(xiàn)基因內(nèi)互補(bǔ)(α互補(bǔ))。IPTG誘導(dǎo)原理先E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?；D(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié)?基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受...

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關(guān)于CCK8實(shí)驗(yàn)步驟的敘述

CCK-8為細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒，細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。必須強(qiáng)調(diào)指出，通過(guò)細(xì)胞分裂，可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì)，平均地分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去?？梢?jiàn)，細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。CCK8實(shí)驗(yàn)步驟如下。CCK-8實(shí)驗(yàn)步驟1、在96孔板中配置100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃，5%CO2）。2、向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。4、向...

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CCK-8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)及相關(guān)問(wèn)題

CellCountingKit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒?？捎糜谒幬锖Y選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)?；盍τ?jì)算：.細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[A(0加藥)－A(空白)]×100A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度...

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