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當前位置:首頁產(chǎn)品中心生化檢測試劑盒-常量法離子系列BC5310-50T/48S細胞鐵含量檢測試劑盒 離子

細胞鐵含量檢測試劑盒 離子
產(chǎn)品簡介:

細胞鐵含量檢測試劑盒 離子
儲存條件
2-8℃
有效期
6個月
單位

英文名稱
Cell Iron Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號:BC5310-50T/48S

更新時間:2024-04-19

廠商性質:生產(chǎn)廠家

訪 問 量 :1890

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品介紹

細胞鐵含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度

貨號:BC5310

規(guī)格:50T/48S

產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液

液體30 mL×1

2-8保存

試劑一

液體15 mL×1

2-8保存

試劑二

液體35 mL×1

2-8保存

試劑三

液體6 mL×1

2-8保存

標準液

液體1 mL×1

2-8保存

溶液的配制: 

1. 標準液:1 μmol/mL Fe3+標準液,臨用前取200μL 1 μmol/mL Fe3+標準液,加入200μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.5μmol/mL標準液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。(實驗中每管需要100μL,為減小實驗誤差,故配制大體積。

產(chǎn)品說明:

元素是人體必須的微量元素之一,它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分,幫助氧的運輸,促進脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂,并影響機體的免疫功能。

鹽酸羥胺將細胞中的Fe3+還原成Fe2+,Fe2+在弱酸條件下與鄰菲羅啉形成橙紅色配合物,在510nm處有吸收峰,測定該波長吸光度即可計算鐵含量。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、低溫離心機、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻

按照細胞數(shù)量(104個)提取液體積(mL)為1000~20001的比例(建議500萬細胞加入0.5mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率200W,超聲3秒,間隔7秒,重復30次),于4℃,8000g離心10min,取上清待測。

若樣本為真菌、細菌等有細胞壁的微生物可以適當延長超聲時間。

二、測定步驟

1. 可見分光光度計預熱30min,波長調(diào)至510nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 1.5mL EP管按下表步驟加樣:

 

 

試劑名稱(μL

測定管

空白管

標準管

樣本

100

-

-

蒸餾水

-

100

-

標準溶液

-

-

100

試劑一

200

200

200

試劑

600

600

600

試劑

100

100

100

充分混勻,25℃靜置顯色10min,于1mL玻璃比色皿中測定510nm處吸光值,分別記為A測定、A空白和A標準,計算ΔA測定=A測定-A空白,ΔA標準=A標準-A空白??瞻坠芎蜆藴?/span>只需做1-2次。

三、細胞鐵含量計算

1. 按細胞數(shù)目計算:

細胞鐵含量(ng/104 cell=C標準液×ΔA測定÷ΔA標準)×V提取×103×55.845÷500

=27.922×ΔA測定÷ΔA標準

2. 按蛋白濃度計算

細胞鐵含量(ng/mg prot =C標準液×ΔA測定÷ΔA標準)×V提取×103×55.845÷Cpr×V提?。?/span>

= 27922.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

C標準液:0.5μmol/mL Fe3+標準液;V提?。杭尤胩崛∫后w積,0.5mL;103:單位換算系數(shù),1μmol=103nmol;55.845Fe的相對原子質量,55.845ng/nmol;500:細胞數(shù)目,500萬;Cpr:蛋白質濃度,mg/mL

注意事項:

1、 如果ΔA測定0.01,可適當加大樣本量后重新測定;如果測定管吸光值大于1,建議將樣本用蒸餾水適當稀釋后進行測定。注意同步修改計算公式

2、 如果按蛋白濃度計算細胞鐵含量,需自行測定樣本上清蛋白濃度。

實驗實例:

1、 500HePG2細胞加入0.5mL提取液進行超聲破碎提取,離心取上清后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.171-0.000=0.171,ΔA標準=A標準-A空白=0.573-0.000=0.573,按細胞數(shù)目計算含量

細胞鐵含量(ng/104 cell=27.922×ΔA測定÷ΔA標準=8.333 ng/104 cell

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