β-羥丁酸含量檢測試劑盒輔酶

產(chǎn)品簡介：

β-羥丁酸含量檢測試劑盒輔酶
有效期
6個月
儲存條件
-20℃
單位
盒
英文名稱
β-Hydroxybutyric acid (β-HB) Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC5080-50T/24S

更新時間：2024-07-08

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1156

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

β-羥丁酸（β-HB）含量檢測試劑盒（WST法）說明書

可見分光光度法

貨號：BC5080

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
試劑一	液體70mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×2支	-20℃保存
試劑三	粉劑×2支	-20℃保存
顯色液	液體4mL×1瓶	-20℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑二：臨用前取一支加入1.5mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復(fù)凍融。

2、試劑三：臨用前取一支加入400μL蒸餾水（約40T），充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存，可以保存2周。避免反復(fù)凍融。

3、標(biāo)準(zhǔn)品：8mg 3-羥基丁酸鈉。臨用前加入980μL蒸餾水，充分溶解，即8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。4℃保存1個月。

4、 工作液配制：臨用前根據(jù)試驗所需量將試劑一、試劑二、試劑三按照850:40:10（共900μL，1T的量）的比例配成工作液，充分混勻，置于37℃保溫15min（此步驟不可省略），現(xiàn)用現(xiàn)配，工作液在4h內(nèi)用完。

產(chǎn)品說明：

β-羥丁酸（β-HB），在嚴(yán)重酸中毒患者體內(nèi)，由于酸中毒使患者體內(nèi)NADH生成增加，進(jìn)而促使β-羥丁酸與乙酰乙酸的比值自正常的2:1提高至16:1。β-羥丁酸在檢測糖尿病酮癥酸中毒診斷、治療中有重要意義，對糖尿病的早期診斷也有重要意義。本試劑盒適用于血清、血漿、尿液等樣本。

在pH8.8和37℃條件下，β-HB在β-羥丁酸脫氫酶（HBDH）催化下脫氫生成乙酞乙酸，同時NAD⁺被還原成NADH；在1-mPMS作用下，WST-1可與NADH反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰。通過檢測450nm下波長變化，可計算出β-HB的含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、 適用樣本

血清、血漿、尿液等樣本，直接檢測即可，若溶液有渾濁可離心后進(jìn)行測定

二、測定步驟

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm，蒸餾水調(diào)零。

2、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：將8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水稀釋至0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。

3、按下表步驟加樣：

試劑名稱（μL）	測定管	對照管	空白管	標(biāo)準(zhǔn)管
樣本	100	100
蒸餾水			100
標(biāo)準(zhǔn)溶液				100
工作液	900		900	900
試劑一		900
37℃條件下反應(yīng)10 min
顯色液	50	50	50	50
37℃條件下避光反應(yīng)20 min
于450 nm處測定吸光度。分別記為A測定、A對照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白?？瞻坠苤恍枳?/span>1-2次；標(biāo)準(zhǔn)曲線只需做1-2次。

三、β-HB含量計算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)（x，mg/mL），以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程y=kx+b，將ΔA測定帶入方程求得x（mg/mL）。

2、計算公式

（1）按照蛋白濃度計算

β-HB含量（μmol /mg prot）=x×V樣÷（V樣×Cpr）÷126.09×1000=7.931x÷Cpr

（2）按照血清（漿）體積計算

β-HB含量（μmol /mL）=x×V樣÷V樣÷126.09×1000=7.931x

V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，100 μL=0.1 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；126.09：β-羥基丁酸鈉分子量，mg/mmol；1000：1mmol=1000μmol。

注意事項：

1、顯色完成后，請在10 min之內(nèi)完成檢測。

2、如果ΔA測定低于或超過標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光值范圍，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。

實驗實例：

1. 取100μL 牛血清按上述步驟進(jìn)行實驗，用1mL玻璃比色皿測定后進(jìn)行計算ΔA測定=A測定-A對照=0.585- 0.057= 0.528，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.7905x+0.0221，的x=0.640。計算

β-HB含量（μmol /mL）=7.931x=5.076 μmol /mL

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β-羥丁酸含量檢測試劑盒 輔酶有效期6個月儲存條件-20℃單位盒英文名稱β-Hydroxybutyric acid (β-HB) Content Assay Kit檢測方法可見分光光度法 Spectrophotometer規(guī)格50T/24S

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